Thử thách đầu tiên diễn ra tại chợ nổi Cái Răng, Nón Lá, Quai Thao, Khăn Rằn cùng mặc áo bà ba, trải nghiệm thử thách bán hàng (bánh mì, bún, nước uống) trên sông nước của người dân miền Tây. Đội chơi hoàn thành thử thách khi bán được 30 sản phẩm, trong thời gian 90 phút. Đội chiến thắng tập trước (Khăn Rằn) được quyền chọn mặt hàng sẽ bán và quyết định 2 món cho các đội còn lại. Đội chơi chiến thắng thử thách này sẽ nhận được đặc quyền sở hữu “Túi tiền địa chủ’”

Ngay từ sáng sớm, các người đẹp di chuyển đến chợ nổi Cái Răng, ăn sáng trên ghe. Á hậu Võ Hoàng Yến cho biết lần đầu ăn sáng trên ghe như thế này, sau đó cô bất ngờ phát hiện mã QR Code dán bên dưới tô bún. Đặc quyền được phân công cho hai đội còn lại khiến Khăn Rằn phải suy nghĩ, phân tích chiến lược. Sau khi chọn bán nước uống, Khăn Rằn cho hai đội còn lại tự “tương tàn” nhau. Ngọc Diễm gợi ý Quai Thao chọn bán bún riêu, Nón Lá bán bánh mì để đỡ công đoạn chế biến.

Cuối cùng, Nón Lá hoàn thành thử thách đầu tiên, nhận 10 điểm. Khăn Rằn theo sau 1 phút, nhận 9 điểm. Chỉ nhận được 8 điểm do về cuối cùng, Ngọc Diễm cho rằng do món bún khó bán hơn bánh mì và nước uống, mặc dù trước đó cô chính là người quyết định chọn bán bún cho Quai Thao.

Tại làng du lịch Mỹ Khánh, các đội chơi sẽ sáng tạo video ngắn biến hình để thực hiện thử thách Đẹp. Các đội chơi được nhà sản xuất cung cấp đạo cụ (lá chuối, vỏ dừa, bó cỏ, lưới cá, bu gà…) và ba đoạn nhạc nền, từ đó sáng tạo ra 3 clip ngắn tạo trend biến hình. Mỗi đội có 05 phút để lựa chọn đạo cụ. Nón Là là đội chiến thắng ở thử thách Đua nên được quyền chọn đạo cụ trước. Tổng thời gian thực hiện thử thách là 90 phút theo các tiêu chí: Đẹp, sáng tạo độc đáo, khả năng lan toả cao.

Ở thử thách Đố, các đội chơi đối diện những câu đố hình và chữ liên quan đến văn hoá, du lịch miền Tây Nam Bộ. Trong mỗi câu hỏi, mỗi đội lần lượt cử 01 thành viên trả lời, 02 thành viên còn lại đứng ở khu vực chờ. Sau khi đọc câu hỏi và suy nghĩ, người chơi nếu có đáp án thì chạy đến bấm chuông để giành quyền trả lời. Nếu trả lời đúng sẽ nhận một bó lúa, hai đội còn lại bị một điểm trừ.

Một bó lúa được đặc chính giữa cầu lắc. Mỗi lượt có 2 thành viên thuộc 2 đội khác nhau tham gia trò chơi. Nhiệm vụ là lấy được bó lúa và đi ngược về phía cầu của đội mình hoặc làm cho đối phương rơi khỏi cầu thăng bằng. Nếu cả hai cùng rơi xuống nước, ai rơi xuống sau sẽ giành chiến thắng. Sau 09 lượt đấu, số bó lúa mà mỗi đội có được sẽ tương ứng với điểm số 10,09,08.

Trong thử thách này, các đội sẽ trở thành những nhà nông thứ thiệt bằng cách bắt chuột trong không gian được định sẵn. Mỗi đội chơi dùng tay bắt càng nhiều chuột càng tốt. Sau 20 phút, đội chơi bắt được nhiều chuột nhất sẽ chiến thắng và nhận 03 điểm duy nhất.